جداسازی اندونکلئاز با محدودیت اثر ecori از باکتری اشرشیاکلی و بررسی فعالیت آن روی dna تیموس گوسا

چکیده اندونکلئازهای بامحدودیت اثر،آنزیمهایی هستند که dna رادرنقاط بخصوصی که واج ترتیب بازی معین ومشخص هستند،برش می دهند.این آنزیمها نحوه اثرشان به ترتیبی است که ایجاد دوانتهای چسبنده درمحل اثر روی dna می نمایند وبدین ترتیب نقش مهمی درپیوند دادن قطعات مختلف dna بایکدیگروایجاد dna نوترکیب ایفامی کنند. آنزیم ecori یکی ازمهمترین،ساده ترین وپرمصرفترین این آنزیمهابه شمار رفته، کاربرد وسیعی درمهندسی ژنتیک دارد دراین طرح،جداسازی این آنزیم ازباکتری اشرشیاکلی سویه ry13 باروشی مختصرو نسبتاساده ای صورت گرفته محصولی ازآنزیم بدست آمد که خلوصی حدود 65-75 دارد جداسازی،براساس کروماتوگرافی ستونی تعویض یونی سوسپانسیون پروتئینی حاصل از خمیرمیکربی انجام گرفت که بااستفاده ازالکتروفو زود درمقایسه باآنزیم استاندار،این آنزیم درفراکسیونی واقع درناحیه دومین پیک منحنی کروماتوگرافی ودرغلظت 4 درصد مولار کلرورپتاسیم محلول شستشودهنده کروماتوگرافی بدست آمد . جهت بررسی فعالیت آنزیم بدست آمده وباداشتن آنزیم استاندارد دررقتهای مختلف اثراین آنزیم روی محلول dna تیموس گوساله بااستفاده ازالکتروفورز روی آگاروز ژل سلاب ،موردبررسی قرارگرفت که فعالیتی برابربا 500 واحد درهرمیلی لیترنشان دا دراین طرح علاوه برارائه روش نسبتا سریعی برای تخلیص آنزیم ecori بامیزانی از خلوص که برای استفاده در dna کلونینگ کافی می باشد،اطلاعات بیشتری ازنحوه فعا این آنزیم روی dna جانداران عالی بدست آمد .